厭氧培養箱之厭氧菌的培養操作

厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養(yang) 厭氧菌，必須創造一個(ge) 無氧的環境。通常用培養(yang) 基中加入還原劑，或用物理、化學方法去除環境中的遊離氧，以降低氧化還原電勢。如皰肉培養(yang) 基、硫基乙酸鈉培養(yang) 基，牛心腦浸液培養(yang) 基等。常用的厭氧培養(yang) 方法有許多，可根據實際情況選用。

1．厭氧缸法接種好標本的平板或液體(ti) 培養(yang) 基試管，可放入厭氧缸內(nei) 培養(yang) ，厭氧缸是普通的幹燥缸，用物理化學的方法使缸內(nei) 造成厭氧環境，從(cong) 而將厭氧菌培養(yang) 出來。

2．厭氧袋（Bio-bag）即在塑料袋內(nei) 造成厭氧環境來培養(yang) 厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nei) 裝氣體(ti) 發生管（有p氫化鈉的碳酸氫鈉固體(ti) 以及5%檸檬酸安瓿）、美蘭(lan) 指示劑管、鈀催化劑管、幹燥劑。放入已接種好的平板後，盡量擠出袋內(nei) 空氣，然後密封袋口。先折斷氣體(ti) 發生管，後折斷美蘭(lan) 指示劑管，命名袋內(nei) 在半小時內(nei) 造成無氣環境。如不突變表示袋內(nei) 已達厭氧狀態，可以孵育。

3．厭氧手套箱（Anaerobie glove box）即厭氧培養(yang) 箱，是迄今為(wei) 止*的培養(yang) 厭氧菌佳儀(yi) 器之一。它是一個(ge) 密閉的大型金屬箱，箱的前麵有一個(ge) 有機玻璃做的透明麵板，板上裝有兩(liang) 個(ge) 手套，可通過手套在箱內(nei) 進行操作，故名。箱側(ce) 有一交換室，具有內(nei) 外二門，內(nei) 門通箱內(nei) 先關(guan) 著。欲放物入箱，先打開外門，放入交換室，關(guan) 上外門進行抽氣和換氣（H2，CO2，N2）達到厭氧狀態，然後手伸入手套把交換室內(nei) 門打開，將物品移入箱內(nei) ，關(guan) 上內(nei) 門。箱內(nei) 保持厭氧狀態，也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘餘(yu) 氧化合成水的原理。該箱可調節溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內(nei) ，還可放入解剖顯微鏡便於(yu) 觀察厭氧菌菌落，這種厭氧箱適於(yu) 作厭氧細菌的大量培養(yang) 研究，大量培養(yang) 基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環境和溫度等均係自動調節。

4.厭氧盒：原理同厭氧袋，有成品銷售。

5.生物耗氧法：在一密閉的容器內(nei) 放以生物（多是植物），消耗氧氣，同時產(chan) 生二氧化碳，供細菌生長用。我沒見過。

6.焦性末食子酸法：在一潔淨的玻片上鋪上紗布或濾紙，均勻撒上焦性末食子酸，然後再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速將已接種細菌的平板倒扣在上麵，用融化的白蠟封邊，造成一個(ge) 封閉空間。焦性末食子酸與(yu) 堿反應後耗氧。該法用於(yu) 厭氧不嚴(yan) 格的厭氧菌的培養(yang) ，簡單。如有梭狀芽孢杆菌。

7.皰肉培養(yang) 基：本身就是一個(ge) 不需特殊設備的厭氧培養(yang) 法。皰肉和肉湯裝入大試管，液麵封凡士林，造成無氧環境。

操作室厭氧環境形成：按使用要求放置好必要的配件和器具，並向操作室內(nei) 放入二個(ge) 無毒塑料袋。通電源開照明燈，開控溫儀(yi) ，調節所需溫度及安全溫度。操作室內(nei) 放入1000g鈀粒(封閉)和500g幹燥劑,並放入美蘭(lan) 指示劑(封閉)。關(guan) 緊取樣室內(nei) 外門，並抽真空校驗。操作室內(nei) 第一次置換（氮氣置換）：先用橡皮管插入操作室內(nei) 進氣口，另一頭插入塑料袋。接通氮氣進氣路，打開氮氣控製閥，使二隻塑料袋充足氮氣，然後紮緊袋口。把乳膠手套套在觀察板法蘭(lan) 圈上並紮緊。把塑料袋內(nei) 氮氣漸漸地放於(yu) 操作室內(nei) ，至全部放出。操作室第二次置換（氮氣置換）重複一 次充氮過程，並注意隨時用腳踏開關(guan) 開閉排氣。操作室第三次置換（混合氣體(ti) 置換）：（混合氣體(ti) 配比為(wei) ：N2↑ 85% H2 ↑ 10% CO2↑ 5%）調換氣路打開混合氣道通閥門進氣，充氣時要隨時腳踏開關(guan) 開閉排氣。混合氣充滿塑料袋後，關(guan) 掉混合氣直通閥（三通閥），使混合氣經過流量計輸入操作並調整流量計，流量為(wei) 每分鍾10毫升左右。把塑料袋內(nei) 混合氣漸漸排於(yu) 操作室內(nei) 。通過三次換氣後，操作室內(nei) 氣體(ti) 含氧量已處於(yu) 極微量狀態。操作室內(nei) 打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進行催化除氧，一 小時後打開美蘭(lan) 指示劑（美蘭(lan) 安瓶）觀察其變色情況，不變色為(wei) 操作室內(nei) 達到厭氧環境。開紫外線滅菌燈，室內(nei) 進行滅菌處理。滅菌時間自定。 

厭氧培養(yang) 箱注意事項：盡可能地安裝於(yu) 空氣清靜，溫度變化較小的地方。開機前應全麵熟悉和了解各組成配套儀(yi) 器、儀(yi) 表的說明書(shu) 、掌握正確的使用方法。培養(yang) 物放入必須是在操作室內(nei) 達到絕對厭氧環境後放入。如發生故障（停氣等原因）操作室內(nei) 仍可保持12小時厭氧狀態。（超過12小時則根據需要把培養(yang) 物取出另作處理）。經常注意氣路有無漏氣現象。調換氣瓶時，注意要紮緊氣管，避免流入含氧氣體(ti) 。真空泵按要求使用，定期檢查加油。停止使用，關(guan) 閉總電源鍵，及設備後部的電源開關(guan) 。

YQX-Ⅱ厭氧培養(yang) 箱是一種在無氧環境條件下進行細菌培養(yang) 及操作的專(zhuan) 用裝置。它能提供嚴(yan) 格的厭氧狀態恒定的溫度培養(yang) 條件和具有一個(ge) 係統化、科學化的工作區域。在本裝置內(nei) 操作培養(yang) ，可以培養(yang) 難生長的厭氧生物，又能避免以往厭氧生物在大氣中操作時接觸氧而死亡的危險性。因此本裝置是厭氧生物檢測科研的理想工具。本裝置也是一物多用的良好儀(yi) 器，如改變操作方式，為(wei) 微需氧菌的生長繁殖提供良好的生長條件。